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雷火亚洲电竞平台官网-人骨肉瘤细胞的背景与培养步骤及应用!

2023-11-06


1、布景人骨血瘤细胞是从一位13岁的白人女性的骨血瘤组织平分离成立的;HOS细胞表示为扁平形态、低饱和密度、软琼脂中的低克隆构成率和对化合物和病毒传染的敏感性。2、细胞培育步调1、培育基和培育冻存前提预备:1)预备MEM培育基(MEM,GIBCO),90%;胎牛血清,10%。2)培育前提:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培育箱湿度为70%-80%。3)冻存液:90%完全培育基,10%DMSO,现用现配。液氮贮存。2、细胞处置:1)苏醒细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇摆解冻,插手4mL培育基夹杂平均。在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育基后吹匀。然后将所有细胞悬液插手培育瓶中培育留宿(或将细胞悬液插手10cm皿中,插手约8ml培育基,培育留宿)。第二天换液并查抄细胞密度。2)细胞传代:假如细胞密度达80%-90%,便可进行传代培育。1.弃去培育上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)在培育瓶中,置在37℃培育箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下不雅察细胞消化环境,若细胞年夜部门变圆并脱落,敏捷拿回操作台,轻敲几下培育瓶后加少许培育基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加培育基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育液后吹匀。4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分雷火电竞网站到新的含8ml培育基的新皿中或瓶中。3)细胞冻存:待细胞发展状况杰出时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培育基后插手少许胰酶,细胞变圆脱掉队,插手约1ml含血清的培育基后插手冻存管中,再添加10%DMSO落后行冻存。3、利用用在人参皂苷Rg3按捺人骨血瘤细胞增殖和其份子机制研究:人参皂雷火app官网下载苷Rg3的甾体布局使得它可以与细胞膜、膜连系离子通道、和胞内和胞外的受体彼此感化来改变细胞的转录程度以来阐扬抗肿瘤感化。研究方式:本尝试利用MTT尝试、流式细胞术、细胞划雷火app官网痕尝试、Transwell细胞侵袭尝试检测了人参皂苷Rg3对骨血瘤细胞系MG-63、HOS和U2OS增殖、凋亡、迁徙、侵袭的影响和对细胞周期感化。又进一步选择MG-63细胞作为研究对象,利用western blot、定量PCR、流式细胞术、小干扰RNA等尝试手段进一步探讨人参皂苷Rg3引诱细胞自噬、凋亡和细胞周期阻滞的具体感化机制。尝试成果:MTT尝试发现人参皂苷Rg3以剂量依靠的体例按捺三种骨血瘤细胞系MG-63、HOS和U2OS的增殖。流式细胞术则验证人参皂苷Rg3的促三种赘瘤细胞系的凋亡。细胞划痕尝试和Transwell细胞侵袭尝试验证了人参皂苷Rg3可以按捺三种骨血瘤细胞系的迁徙和侵袭。WB尝试发现经人参皂苷Rg3处置的的骨血瘤细胞MG-63中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的程度与未加药的对比组比拟有显著性地升高。Western blot和定量PCR证实人参皂苷Rg3组caspase-3的基因和卵白表达程度增添,流式细胞术证实人参皂苷Rg3组细胞凋亡程度升高。而当利用代表性自噬通路按捺剂3-MA和人参皂苷Rg3同时感化在MG-63细胞时,WB尝试和定量PCR显示3-MA可以显著逆转由人参皂苷Rg3致使的细胞凋亡和自噬相干卵白的转录和表达程度的转变。而用小干扰RNA手艺缄默LC3基因可以显著逆转人参皂苷Rg3致使的MG-63细胞的凋亡和迁徙侵袭受限。WB尝试显示人参皂苷Rg3可使p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTORC1/mTORC1表达程度下降,而LC3/β-actin的表达程度增高,而插手PI3K冲动剂IGF-1则可以逆转人参皂苷Rg3致使的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTORC1/mTORC1和LC3/β-actin表达程度的转变。流式细胞术查验经人参皂苷Rg3处置的骨血瘤细胞系MG-63、HOS、U2OS处在G0/G1的细胞的比例上升,处在S期的细胞比例降落。WB尝试成果显示人参皂苷Rg3处置的MG-63细胞中cyclinA、cyclinB的表达未见较着改变,而cyclinD1、CDK-4和CDK-6的表达量显著降落,上游调理因子p53、p21的表达量显著上升。北京百欧博伟生物手艺有限公司的微生物菌种查询网供给微生物菌种收藏、测序、采办等办事,是中国微生物菌种收藏中间的办事平台,而且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培育基为一体的年夜型微生物查询类网站,自设装备和手艺的微生物菌种收藏中间!接待泛博客户来询!下载附件-雷火电竞网站



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