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雷火亚洲电竞平台官网-人结直肠腺癌细胞的培养操作步骤及应用!

2023-09-30


1、布景人结直肠腺癌细胞分手自直肠原位癌。人结肠癌Caco-2细胞系在尺度培育前提下会合后,自觉分化为肠上皮样细胞,是经常使用的肠癌细胞模子。当长到满时,细胞表示出特点性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达维甲酸连系卵白I和维甲酸连系卵白II,并呈角质卵白阳性。2、人结直肠腺癌细胞的培育1、培育基和培育冻存前提预备:1)预备MEM根本培育基78%优良胎牛血清20%雷火电竞官网入口P/S青霉素-链霉素1%MEMNEAA非必须氨基酸1%2)培育前提:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培育箱湿度为70%-80%。1)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。2、细胞处置:1)冻存细胞的苏醒:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇摆解冻,插手到含4-6mL完全培育基的离心管中夹杂平均。在1000RPM前提下离心3-5min,弃去上清液,完全培育基重悬细胞。然后将细胞悬液插手含6-8ml完全培育基的培育瓶(或皿)中37℃培育留宿。第二天显微镜下不雅察细胞发展环境和细胞密度。2)细胞传代:假如细胞密度达80%-90%,便可进行传代培育。对贴壁细胞传代可以参考以下方式:1、弃去培育上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、插手0.25%(w/v)胰卵白酶-0.53mMEDTA在培育瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置在37℃培育箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以恰当耽误消化时候),然后在显微镜下不雅察细胞消化环境,若细胞年夜部门变圆并脱落,敏捷拿回操作台,轻敲几下培育瓶后插手3-4ml含10%FBS的培育基来终止消化。3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM前提下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培育液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml依照仿单要求设置装备摆设的新的完全培育基以连结细胞的发展活力,后续传代按照现实环境按1:2~1:5的比例进行。3)细胞冻存:收到细胞后建议在培育前3代时冻存一批细胞种子以备后续尝试利用。3、利用人结直肠腺癌细胞可以用在年夜黄附子有用成份配伍在Caco-2细胞模子上的跨膜转运研究:研究年夜黄酸、年夜黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱,和年夜黄酸、年夜黄素别离与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后在人结直肠腺癌细胞(Caco-2)细胞模子上转运进程,并切磋其配伍机制。方式:以年夜黄酸、年夜黄素、苯甲酰乌头原碱、去甲乌药碱在Caco-2细胞上的积累转运量还表不雅渗入系数Papp值为指标,采取高效液相色谱法(HPLC)对年夜黄酸、年夜黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱的含量进行检测,考查年夜黄酸、年夜黄素、去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱雷火电竞网站官网在Caco-2细胞上的转运行动,和年夜黄素、年夜黄酸、与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱别离配伍后转运行动的转变。经由过程免疫荧光PCR方式检测年夜黄素、年夜黄酸与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后对Caco-2细胞中外排转运卵白:乳腺癌耐药卵白(BCRP)、P-糖卵白(Pgp)、多耐药相干卵白(MRP2、MRP3)基因表达的影响。经由过程western-blot方式检测年夜黄素、年夜黄酸与去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱配伍后对Caco-2细胞中外排转运卵白乳腺癌耐药卵白(BCRP)、P-糖卵白(P-gp)、多耐药相干卵白(MRP2、MRP3)卵白表达的影响。成果:去甲乌药碱Papp值均在1×10-7cm·s-1数目级,外排与接收比值约为1.5,配伍年夜黄酸、年夜黄素后其Papp值均显著性上升(P&lt雷火app下载官网;0.05)。苯甲酰乌头原碱配伍年夜黄酸后Papp值显著性上升(P<0.05),苯甲酰乌头原碱配伍年夜黄素后Papp值显著性降落(P<0.05)。年夜黄素配伍苯甲酰乌头原碱后Papp值显著性上升(P<0.05)。年夜黄素配伍去甲乌药碱、乌头碱后Papp值显著性降落(P<0.05)。年夜黄酸配伍去甲乌药碱、苯甲酰乌头原碱、乌头碱后Papp值显著性降落(P<0.05)。去甲乌药碱增进外排转运卵白BCRP、MRP2的表达,按捺P-gp的表达。配伍年夜黄酸后按捺P-gp的表达;配伍年夜黄素后按捺Caco-2中MRP2和BCRP的表达。苯甲酰乌头原碱可以增进BCRP、MRP2的表达,按捺MRP3的表达;配伍年夜黄酸后,下调MRP2、BCRP的表达。年夜黄酸可以按捺BCRP的表达量;配伍去甲乌药碱后,MRP2的卵白表达量上调;年夜黄酸配伍苯甲酰乌头原碱后,增进BCRP的表达,下调MRP3的表达。年夜黄酸配伍乌头碱后,引诱MRP2、BCRP的表达。年夜黄素引诱了MRP3和BCRP的表达。配伍去甲乌药碱后,增进MRP2的表达。配伍苯甲酰乌头原碱后P-gp外排。配伍乌头碱后,引诱了MRP2的外排感化。结论:年夜黄经由过程增添附子中水溶性成份和单酯型生物碱的接收来增添附子的医治感化,而附子经由过程下降年夜黄蒽醌的接收来下降年夜黄的寒性物资根本,减轻年夜黄对人体的副感化。其感化机理与各个成份对外排转运卵白P-gp、MRP2、MRP3或BCRP的按捺或引诱感化有关。北京百欧博伟生物手艺有限公司的微生物菌种查询网供给微生物菌种收藏、测序、采办等办事,是中国微生物菌种收藏中间的办事平台,而且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培育基为一体的年夜型微生物查询类网站,自设装备和手艺的微生物菌种收藏中间!接待泛博客户来询!下载附件-雷火电竞网站



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