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雷火亚洲电竞平台官网-人食管鳞癌细胞的背景与应用及培养操作步骤!

2023-09-28


1、布景人食管鳞癌细胞从一名49岁,已接管过放雷火电竞网站官网疗的日本女性患者的颈部食管平分离成立的低分化食管鳞癌。癌组织已侵袭至相邻组织。文献报导细胞携带有增多的癌基因C-ERB-B(8倍)和CYCLIN D1(4倍)而且细胞在裸鼠中可以或许成瘤。人食管鳞癌细胞系集落不法则没有显著角质化的侵染性鳞状细胞癌。单层培育的细胞间可以不雅察到带状毗连,也留意到有细胞质张力丝。1970年发现支原体污染并去除。肿瘤坏死因子(TNF)α按捺ME-180的发展。这株细胞含有人乳头瘤病毒(HPV)DNA,与HPV-39的同源性高在HPV-18。2、人食管鳞癌细胞培育操作1)雷火电竞下载苏醒细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中敏捷摇摆解冻,插手4mL培育基夹杂平均。在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育基后吹匀。然后将所有细胞悬液插手培育瓶中培育留宿(或将细胞悬液插手10cm皿中,插手约8ml培育基,培育留宿)。第二天换液并查抄细胞密度。2)细胞传代:假如细胞密度达80%-90%,便可进行传代培育。1.弃去培育上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)在培育瓶中,置在37℃培育箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下不雅察细胞消化环境,若细胞年夜部门变圆并脱落,敏捷拿回操作台,轻敲几下培育瓶后加少许培育基终止消化。3.按6-8ml/瓶补加培育基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM前提下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培育液后吹匀。4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培育基的新皿中或瓶中。3)细胞冻存:待细胞发展状况杰出时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为类;1.细胞冻存时,弃去培育基后,PBS清洗一遍后插手1ml胰酶,细胞变圆脱掉队,插手1ml含血清的培育基终止消化,可以使用血球计数板计数。2.4 min 1000rpm离心去失落上清。加1ml血清重悬细胞,按照细胞数目插手血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低在1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,留雷火app下载官网意冻存管做好标识。3.将冻存管置在法式降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时今后转入液氮灌贮存。记实冻存管位置以便下次拿取。3、利用人食管鳞癌细胞可以用在ZNF382按捺人食管鳞癌细胞发展与转移的功能与机制研究:研究ZNF382在人食管鳞癌中的表不雅遗传学调控和按捺人食管鳞癌细胞发展与转移的功能与份子机制研究。方式和成果:及时荧光定量PCR检测15对人食管鳞癌组织和癌旁组织中ZNF382的差别性表达,成果显示ZNF382在人食管鳞癌组织中的表达程度显著低在癌旁组织(p<0.05)。MSP别离检测ZNF382在114例人食管鳞癌组织与3例正常食管上皮组织中的甲基化状况,发现87%的食管鳞癌组织产生了启动子区的甲基化,而在正常食管上皮组织中甲基化产生率只有33%。同时TCGA在线数据库阐发183例食管鳞癌患者ZNF382表达程度差别与食管鳞癌患者5年总保存的相干性,发现ZNF382表达程度较高的患者,其5年总保存期较长。进而经由过程一系列生物学功能尝试别离在食管鳞癌细胞中外源性过表达ZNF382和敲低内源性ZNF382表达后,不雅察其对食管鳞癌细胞增殖,凋亡和转移的感化。最后为进一步明白ZNF382在食管鳞癌中阐扬细胞功能的具体份子机制,送检了RNA-sequence测序并连系GEO数据库的CHIP-Seq测序成果,结合生物信息学阐发,RT-PCR验证,Western blot和双荧光素酶陈述尝试得出结论,ZNF382作为19q13.12的新抑癌基因经由过程直接连系到DVL2和FZD1基因的启动子区按捺Wnt/β-catenin旌旗灯号通路活性从而在人食管鳞癌细胞中阐扬抑癌功能。结论:ZNF382是位在19q13.12的新抑癌基因,直接连系到FZD1和DVL2基因的启动子区按捺Wnt/β-catenin通路活性从而在人食管鳞癌细胞中阐扬抑癌感化。北京百欧博伟生物手艺有限公司具有对菌种、细胞、培育基、配套试剂等产物需求者的极优良办事,对采办项目标前期资料供给,中期合同包管,后期货色跟踪到终究售后简直保项目正确到位,都有相干人士进行保护,确保您在微生物菌种查询网中取得最优良办事!也正由于此,北京百欧博伟生物手艺有限公司与国表里多家研制单元、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着杰出、持久和不变的合作关系!下载附件-雷火电竞网站



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